[摘要] 目的 建立反相高效液相法測(cè)定增光片中五味子醇甲含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(60∶5∶32);檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。結(jié)果 五味子醇甲在0.0672～0.672μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系;平均回收率為97.64%，RSD=1.21%。結(jié)論 該方法不僅操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，且重復(fù)性好，可用于增光片的質(zhì)量控制。

　　[關(guān)鍵詞] 反相高效液相法;增光片;五味子醇甲;含量測(cè)定

　　增光片是由枸杞子、當(dāng)歸、黨參、茯苓、五味子等10味中藥組成的中藥復(fù)方制劑。具有補(bǔ)益氣血、滋養(yǎng)肝腎、明目安神、增加視力的功效，臨床上用于治療近視眼[1]。本品收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊(cè)，原標(biāo)準(zhǔn)中只有顯微鑒別和通用的理化鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目，為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文建立反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測(cè)定增光片中五味子醇甲的含量，抑制增光片的質(zhì)量，以確保臨床療效[2～5]。

　　1 儀器與試劑

　　1.1 儀器 日本島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測(cè)器;CT-100恒溫箱。LC2002數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。上海必能信CQ-250型超聲波清洗器。BP211DAG電子天平(德國(guó)Sartorius)。

　　1.2 試劑 甲醇為色譜醇;甲醇、天水乙醇、乙腈均為分析純;水為重蒸水。五味子醇甲(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110857-200304);增光片(湖南德海制藥有限公司，批號(hào)：030426)。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件 (1)色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱Diamonsil(TM)C18(250×4.6mm)，5μm(迪馬公司);(2)流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水(60∶5∶32);(3)檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm;(4)流速：1.0ml/min;(5)柱溫：40℃。

　　論文網(wǎng)推薦：《中醫(yī)文獻(xiàn)雜志》前身是《杏苑》雜志，創(chuàng)刊于1956年上海市中醫(yī)文獻(xiàn)館復(fù)館之初。為內(nèi)部刊物， 不定期出版。由當(dāng)時(shí)館長(zhǎng)董廷遙親筆題寫了刊名。1987年《杏苑》被上海市新聞出版局批準(zhǔn)為正式內(nèi)部刊物，以季刊形式定期出版發(fā)行，更名為《杏苑中醫(yī)文獻(xiàn)雜志》，明確以“繼承發(fā)揚(yáng)老中醫(yī)學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)，整理研究古今中醫(yī)藥文獻(xiàn)”為辦刊宗旨。隨著該刊在國(guó)內(nèi)外的影響日益擴(kuò)大，作為內(nèi)部刊物已很難適應(yīng)海內(nèi)外中醫(yī)界的要求，在上海市科委和上海市新聞出版局的積極支持下，于1994年正式批準(zhǔn)本刊國(guó)內(nèi)外公開發(fā)行，并更名為《中醫(yī)文獻(xiàn)雜志》。

　　2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥12h的五味子醇甲對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.0336mg的溶液，即得。

　　2.3 供試品溶液的制備 取增光片20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，以甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。

　　2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例稱取除五味子的其他藥材適量，依照增光片的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

　　2.5 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取五味子醇甲對(duì)照品溶液(濃度0.0336mg/ml)2μl、4μl、8μl、12μl、20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以五味子醇甲的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為Y=8E+06X+23682(r=0.9997)。結(jié)果表明五味子醇甲在0.0672～0.672μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

　　2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取五味子醇甲對(duì)照品溶液(0.0336mg/ml)10μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積積分值分別為2395570、2440616、2396849、2394535、2467203、2425933，RSD=1.24%。表明本方法精密度良好。

　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批增光片(批號(hào)：030426)，除去糖衣，研細(xì)，取細(xì)粉5份，每份約2g，精密稱定，按2.3項(xiàng)下的方法制備樣品，進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果分別為0.1026mg/片、0.0999mg/片、0.0992mg/片、0.0986mg/片、0.0982mg/片，平均為0.0997mg/片，RSD為1.75%。表明本方法具有較好的重復(fù)性。

　　2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下試驗(yàn)號(hào)4的供試品溶液，每2h進(jìn)樣1次，每次10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果表明在10h內(nèi)峰面積積分值基本穩(wěn)定，RSD為1.58%。結(jié)果平均回收率為97.64%，RSD為1.21%。見(jiàn)表1。

　　2.9 回收率試驗(yàn) 貯備溶液：精密稱取五味子醇甲對(duì)照品3.7mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1ml中含五味子醇甲0.37mg的溶液。

　　取已知含量(批號(hào)：030426，含量為0.0997mg/片)的增光片，除去糖衣，研細(xì)，取1.0g(6份)，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入貯備溶液0.8ml、1ml、1.2ml，置水浴上揮發(fā)至干，按供試品溶液制備方法進(jìn)行制備并測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為97.64%，RSD為1.21%。見(jiàn)表1。

　　表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)

　　2.10 樣品測(cè)定 按擬定的含量測(cè)定方法測(cè)定10批增光片中五味醇甲的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

　　表2 含量測(cè)定結(jié)果(略)

　　3 討論

　　筆者曾對(duì)提取溶媒、提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果以加入甲醇、超聲處理45min為佳。干擾試驗(yàn)結(jié)果表明：五味子的陰性對(duì)照樣品無(wú)干擾。方法學(xué)考察結(jié)果表明：五味子醇甲在0.0672～0.672μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系;該方法精密度良好，具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，平均回收率為97.64%。因此該方法可用于增光片的質(zhì)量控制。根據(jù)測(cè)定的結(jié)果，并考慮到藥材的產(chǎn)地、采收、加工等因素，暫定每片增光片含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計(jì)，不得少于0.05mg。

　　[參考文獻(xiàn)]

　　1 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1996，207.

　　2 趙陸華.高效液相色譜法分析中藥成分手冊(cè).北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1994，216.

　　3 楊云.中藥化學(xué)成分提取分離手冊(cè).北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1998，73.

　　4 陳德昌.中藥化學(xué)對(duì)照品工作手冊(cè).北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2000，18.

　　5 譚生建.肝復(fù)康中五味子醇甲和五味子乙素含量測(cè)定方法的研究.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000，16(5)：270.