摘要：為明確提取方法對(duì)清香木果實(shí)精油成分及抑菌和抗氧化活性的影響，采用超聲輔助水蒸氣蒸餾法(USD)和微波輔助水蒸氣蒸餾法(MSD)提取精油，通過(guò)固相微萃取(SPME)和氣相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)測(cè)定精油的化學(xué)成分，采用濾紙片法和自由基清除法檢測(cè)抑菌和抗氧化活性。結(jié)果表明：兩種精油的主要成分均為 (+)-α- 蒎烯，USD 提取的精油中相對(duì)含量較高，為 55.21%。MSD 提取的精油對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑制作用強(qiáng)于 USD 提取的精油，其對(duì) 3 種菌的最低抑菌濃度(MIC)分別為 25、50、50 mg/mL。兩種精油均具有較強(qiáng)的抗氧化活性，MSD 提取的精油對(duì) 1,1 - 二苯基 - 2 - 三硝基苯肼(DPPH)自由基和羥基自由基清除能力較強(qiáng)，USD 提取的精油對(duì) 2,2 - 聯(lián)氮 - 二 (3 - 乙基 - 苯并噻唑 - 6 - 磺酸) 二銨鹽(ABTS)陽(yáng)離子自由基、超氧陰離子自由基清除能力以及對(duì) Fe³?還原能力較強(qiáng)。兩種方法提取的清香木果實(shí)精油均具有良好的抑菌和抗氧化活性，可作為抑菌劑和抗氧化劑資源進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用。

　　關(guān)鍵詞：清香木;精油;提取方法;化學(xué)成分;抑菌活性;抗氧化活性

　　1 材料與方法

　　1.1 材料與設(shè)備

　　1.1.1 材料與試劑

　　材料：清香木成熟果實(shí)(采自云南省保山市隆陽(yáng)區(qū)，洗凈晾干后 - 20℃保存)。

　　試劑：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂條、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、DPPH、ABTS、無(wú)水乙醇等(具體來(lái)源見(jiàn)原文)。

　　1.1.2 儀器與設(shè)備

　　7890A-5975C 型氣質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)安捷倫)、50/30 μm DVB/CAR/PDMS 頂空固相微萃取頭(美國(guó) Supelco)、XM-800UVF 型智能靜音超聲波清洗機(jī)等(具體型號(hào)及來(lái)源見(jiàn)原文)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 清香木果實(shí)精油的制備

　　USD 提?。悍Q取 120 g 搗碎果實(shí)，按 1∶5 料液比加水，30℃、40 kHz、240 W 超聲 30 min，水蒸氣蒸餾 3 h。

　　MSD 提取：微波功率 480 W 處理 7 min，水蒸氣蒸餾 3 h。

　　得率計(jì)算：精油得率 (%) = (精油質(zhì)量 / 果實(shí)質(zhì)量)×100。

　　1.2.2 清香木果實(shí)精油成分分析

　　SPME 條件：5 μL 精油 + 2 mL 正己烷，20℃萃取 30 min。

　　GC-MS 條件：HP-5MS 色譜柱，升溫程序見(jiàn)原文;離子源 EI，掃描質(zhì)量范圍 20~500 amu。

　　1.2.3 清香木果實(shí)精油的抑菌活性測(cè)定

　　抑菌圈直徑測(cè)定：濾紙片法，150 μL 菌懸液涂布培養(yǎng)基，5 μL 精油滴于濾紙片，37℃培養(yǎng) 24 h 后測(cè)量。

　　最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定：二倍稀釋法配制 3200~25 mg/mL 精油，以產(chǎn)生抑菌圈的最小濃度為 MIC。

　　1.2.4 清香木果實(shí)精油的抗氧化活性測(cè)定

　　DPPH 自由基清除能力：2 mL DPPH 溶液(0.2 mg/mL)+2 mL 精油，519 nm 測(cè)吸光度，計(jì)算清除率及 IC??。

　　羥基自由基清除能力：精油 + 硫酸亞鐵 + 過(guò)氧化氫 + 水楊酸，510 nm 測(cè)吸光度。

　　ABTS 陽(yáng)離子自由基清除能力：ABTS 溶液 + 精油，734 nm 測(cè)吸光度。

　　超氧陰離子自由基清除能力：Tris-HCl 緩沖液 + 精油 + 鄰苯三酚，299 nm 測(cè)吸光度。

　　Fe³?還原能力：精油 + 磷酸緩沖溶液 + 鐵氰化鉀，700 nm 測(cè)吸光度，吸光度越高還原能力越強(qiáng)。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 兩種方法提取的清香木果實(shí)精油化學(xué)成分比較

　　得率：USD 法 0.052%，MSD 法 0.049%，均高于水蒸氣蒸餾法(0.037%)。

　　成分鑒定：USD 精油鑒定出 18 種化合物(相對(duì)含量 84.87%)，MSD 精油鑒定出 22 種(96.83%)，主要成分為萜烯類，共有成分 13 種，其中 (+)-α- 蒎烯在 USD 和 MSD 精油中相對(duì)含量分別為 55.21% 和 49.45%。

　　特有成分：MSD 精油含 (+)- 檸檬烯(17.52%)等 9 種特有成分，USD 精油含 (-)-β- 蒎烯(4.00%)等 5 種特有成分。

　　類別化合物名稱相對(duì)含量(USD 精油)相對(duì)含量(MSD 精油)

　　萜烯類(+)-α- 蒎烯55.21%49.45%

　　β- 月桂烯13.95%22.29%

　　酯類鄰苯二甲酸二乙酯-0.15%

　　其他十甲基環(huán)五硅氧烷0.80%0.34%

　　2.2 兩種方法提取的清香木果實(shí)精油抑菌活性

　　抑菌圈直徑：兩種精油對(duì) 3 種菌的抑菌圈直徑均為 14~20 mm(敏感)，MSD 精油抑菌圈大于 USD 精油。

　　MIC：USD 精油對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的 MIC 分別為 50、50、100 mg/mL;MSD 精油分別為 25、50、50 mg/mL，抑菌效果更強(qiáng)。

　　2.3 兩種方法提取的清香木果實(shí)精油的抗氧化能力

　　DPPH 自由基清除能力：MSD 精油清除率高于 USD 精油，40.0 mg/mL 時(shí)清除率分別為 96.30% 和 92.37%，IC??分別為 6.46 和 7.32 mg/mL。

　　羥基自由基清除能力：96 mg/mL 時(shí) USD 和 MSD 精油清除率分別為 94.02% 和 93.02%，IC??分別為 28.45 和 27.32 mg/mL。

　　ABTS 陽(yáng)離子自由基清除能力：USD 精油清除率高于 MSD 精油，40.0 mg/mL 時(shí)清除率分別為 96.30% 和 94.43%，IC??分別為 8.32 和 10.46 mg/mL。

　　超氧陰離子自由基清除能力：96 mg/mL 時(shí) USD 和 MSD 精油清除率分別為 94.63% 和 91.40%，IC??分別為 32.56 和 38.72 mg/mL。

　　Fe³?還原能力：96 mg/mL 時(shí) USD 和 MSD 精油吸光度分別為 2.013 和 2.002，USD 還原能力更強(qiáng)。

　　3 結(jié)論

　　提取得率與成分：USD 和 MSD 法提取的清香木果實(shí)精油得率分別為 0.052% 和 0.049%，主要成分為 (+)-α- 蒎烯，MSD 精油含更多 (+)- 檸檬烯。

　　抑菌活性：兩種精油對(duì) 3 種菌均有較強(qiáng)抑制作用，MSD 精油抑菌效果更優(yōu)，MIC 更低。

　　抗氧化活性：MSD 精油對(duì) DPPH 和羥基自由基清除能力更強(qiáng)，USD 精油對(duì) ABTS、超氧陰離子自由基清除及 Fe³?還原能力更強(qiáng)。

　　應(yīng)用價(jià)值：清香木果實(shí)精油具有良好的抑菌和抗氧化活性，可作為天然抑菌劑和抗氧化劑開(kāi)發(fā)利用。

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