【摘要】高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。文章發(fā)表在《comparative biochemistry and physiology》上，是SCI期刊代選范文，供同行參考。

　　【關(guān)鍵詞】 鹽酸小檗堿;復(fù)方檗龍片;含量測(cè)定;HPLC

　　[Abstract] Objective To establish an HPLC method to determine berberine from prescription of berberine.Methods Yilite C18(250mm×4.6mm,5μm)column was used, the mobile phase consisted of methyl cyanide-water-0.6%KDP-0.3%SDS(100:100:1:1), the flow rate was 1.0ml/min and the UV detector was set at 345nm. Results The method displayed good linearity within the concentration ranges of 21.2～318.0ng/ml(r2=0.9998). The average recovery was 98.59%, RSD:0.34%.Conclusion This method is simple, accurate, replicate and suitable for the determination of berberine in prescription of berberine.

　　[Key words] berberine;prescription of berberine pill;determination;HPLC

　　復(fù)方檗龍片，由龍膽花、小檗皮、甘草、木香、陳皮等多味中藥材組成，含有龍膽堿、龍膽苦苷、三萜皂苷類(lèi)成分、生物堿及莨菪類(lèi)成分等，具清熱化痰，止咳平喘的功效[1]。小檗堿是主要有效成分之一，臨床主要用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染、眼結(jié)膜炎[2，3]。本實(shí)驗(yàn)建立HPLC法測(cè)定復(fù)方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量，簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、專(zhuān)屬性好，適用于制劑的含量測(cè)定和質(zhì)量控制。

　　目的采用反相高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定復(fù)方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量。方法色譜柱：依利特C18(250mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相：乙腈-水-0.6%磷酸二氫鉀-0.3%十二烷基磺酸鈉(100:100:1:1)，流速：1.0ml/min，柱溫：40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為345nm。結(jié)果 線(xiàn)性關(guān)系良好，線(xiàn)性范圍21.2～318.0 ng/ml;Y=3510000X-15900，r2=0.9998，平均回收率為98.59%，RSD：0.34%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于復(fù)方檗龍片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。

　　1 儀器與試藥

　　1.1 儀器

　　島津HPLC色譜儀(LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外檢測(cè)器)，Anastar色譜工作站;梅特勒AE-240雙量程電子分析天平;雷磁PHS-3C精密pH計(jì)。

　　1.2 試藥

　　鹽酸小檗堿對(duì)照品(由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，07139906，純度99.68%)，供試品為市場(chǎng)抽樣;乙腈(色譜純，德國(guó)默克，SF81219)，水為重蒸餾水，磷酸二氫鉀(分析純，南京化學(xué)試劑一廠(chǎng)，20071121)，其他試劑為分析純。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱：依利特C18(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相：乙腈-水-0.6%磷酸二氫鉀-0.3%十二烷基磺酸鈉(100：100：1：1);流速：1.0ml/min;柱溫：40℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：345nm;進(jìn)樣量：10μl。

　　2.2 對(duì)照品及供試品溶液制備

　　2.2.1 對(duì)照品溶液

　　精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品2.12mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得21.2μg/ml鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液。

　　2.2.2 供試品溶液

　　取復(fù)方檗龍片20片，研細(xì)，取細(xì)粉約1片量，精密稱(chēng)定，置100ml容量瓶中，精密加入甲醇40ml，超聲處理20min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，靜置30min，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

　　SCI期刊代選須知：Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Physiology, Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Comparative Biochemistry and Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Comparative Pharmacology;期刊領(lǐng)域：比較生物化學(xué)與生理學(xué)領(lǐng)域： A部分：生理學(xué)，比較生物化學(xué)與生理學(xué) B部分：比較生物化學(xué)與比較生物化學(xué)與生理學(xué) C部分：比較藥理學(xué);

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